Litaolo tsa Peptide tsa Synthetic - Khetho ea Chromatographic, Ho Tsepamisa Maikutlo le Nako ea ho Tšoara
Tripeptide 1 Morekisi Peptide ea Lyophilized Lilaboratori tse peli li ka amohela thepa ho tsoa sehlopheng se le seng sa peptide 'me tsa tlaleha liphetho tse fapaneng tsa tlhahlobo ntle le tlhokomeliso hang-hang tse pakang ho hloleha ho kopaneng.. Phapang ka karohano, kabelo ya mahloriso, le histori ea mohlala e ka fetola se lekantsoeng. Litaolo tse ntle li thusa ho khetholla menyetla eo pele sehlopha se amoheloa, hanoa, kapa se sebedisoang ho hlalosa sephetho sa baeloji.
Sengoliloeng sena se arola mehato e meraro e ka shebahalang e tšoana morerong oa ho qetela: ho fetola fensetere ea tlhahlobo, ho fetola mohopolo o fanoeng le ho fetola nako ea ho ts'oara sampole. Khetha taolo ho latela hore na ho kenella ho ka hlalosa phapang.
Mohlala o sebetsang ke oa boikaketsi: H- TLETLEBA TLETLEBO-NH2, peptide ea masalla a leshome le metso e tšeletseng e nang le Nterminus ea mahala, sebaka se senyenyane sa C, le tlhophiso ea L ho masalla ohle a chiral. Ha e hlahisoe e le peptide e sebetsang e netefalitsoeng. Laeborari e 'ngoe e hlokomela letšoao le lenyenyane la sepheo ka mor'a hore tharollo e lokiselitsoeng e tšoaroe pele ho hlahlojoa, leha COA e tlaleha bohloeki ba sebaka se phahameng.
Ho shebella ke phapang ea pontšo. Litlhaloso tse ka bang teng li kenyelletsa mohopolo o fetotsoeng, tahlehelo ea mohlala, phetoho ea lik'hemik'hale, tšitiso, kapa tshebetso ya tshekatsheko. Taolo e lokela ho sebetsana le e 'ngoe ea litlhaloso tseo ho e-na le ho eketsa mohlala o mong ho matha.
E feto-fetohang: chromatographic selectivity e fetola seo u ka se bonang
Tšoara beche ea peptide 'me u itokisetse kamehla, ebe u hlahloba phetoho e utloahalang ea mokhoa oa karohano. Mokhahlelo o fapaneng oa ho ema, boemo ba mehala-mohato, kapa gradient e ka fetola hore na litšila tse amanang le tsona li arohane le sepheo. Bohloeki ba sebaka se tlalehiloeng bo ka fetoha hobane mokhoa o rarolla likarolo ka tsela e fapaneng, le haeba sebopeho sa vial se sa fetoha.
Tsela e lebeletsoeng ha se ho ea holimo kapa tlase hohle. Tharollo e betere e ka pepesa ho se hloeke ho neng ho balletsoe nakong e fetileng ka har'a tlhoro e kholo. Mokhoa o mong o ka fokotsa karohano kapa oa qhelela ka thoko karolo e sa bolokoang hantle fensetereng ea ho kopanya. Liphapang tsa nako ea ho boloka feela ha li khetholle phetoho ea lik'hemik'hale.
Litaolo tse nang le thuso li kenyelletsa ho hloka letho ho itokisa, boitsebiso bo loketseng ba tšupiso, le cheke e loketseng hore mokhoa ona o ka khetholla ho se hloeke ha ho ameha. Aterese e se nang letho e fana ka aterese ea tšilafalo kapa thepa; e ke ke ea paka hore sepheo le isomer ea eona ea sebopeho li rarolloa. Referense e theha papiso feela bakeng sa likarolo tseo e hlileng e li khethollang.
Thala tlhaloso e 'ngoe pele. Haeba potso ke hore na tšobotsi e ncha ke bokamorao, sekheo se loketseng se na le tsebo. Haeba potso ke hore na sepheo le a Li-peptide tsa Ghrp karolo e amanang le coelute, se se nang letho se ke ke sa qholotsa phapang eo. Haeba potso ke hore na sepheo sa chelete se fokotsehile, sephetho sa sebaka se amanang se ka 'na sa se be se hlokoang.
Taolo e tšoanang e ka ba molemo bakeng sa potso e le 'ngoe' me ea khutsa ho e 'ngoe. Ngola karolo e lebelletsoeng pele u bona sephetho e le hore pono e bonolo ea ho feta e se ke ea ba tumello ea sepheo sohle.
Bakeng sa tatellano e pheta-phetoang ea KLAG, boloka tlhaloso e nepahetseng ea limolek'hule hape. Taolo ea "cationic peptide" e tloaelehileng ha e thehoe Moetsi oa Tripeptide amide ea sepheo sa sepheo, taelo ea masalla kapa chelete e abetsoeng. Ho tšoana ke mabaka a utloahalang a ho hlahloba, eseng ho lekana ka tsela e iketsang.
Taolo e qhekellang e hlahisa phapang e 'ngoe. Sepheo sa ho ruta se na le tse 'nè tsa Lys, Leu, Ala le Gly, kahoo tumello e ka boloka sebopeho sa masalla ha e ntse e fetola tatellano. Ka termini e tšoanang, e bolokang sebopeho se baliloeng se sa fetohe. Ha e fane ka tiisetso ea boitšoaro bo tšoanang ba 'mele kapa ho ba sieo ha liphello tsa likokoana-hloko.
Mopitsi ea joalo a ka sebetsana le khopolo-taba e itseng ea tatellano ea tatellano ha ho nepahala ha eona ho thehiloe. Ha e khone ho netefatsa ka boits'oaro palo kapa botsitso ba sepheo sa mantlha. Sireletsa boitsebahatso ba taolo le litlhoko tsa boitokiso ho fapana le ho nka hore karolo ea eona e le taolo e etsa hore e se ke ea hlaha..
Lebitso la taolo ha lea lokela ho nkela tlhaloso ea hore na papiso ea lona e ka theha eng.
The FDA-e fanoeng ICH Q2(R2) tataiso e bua ka khetho bakeng sa morero o reriloeng le mekhoa ea tlatsetso moo ho hlokahalang. Mohloli oa bobeli o eketsa tlhahisoleseding e molemo feela ho fihlela moo e sebetsanang le phapang e nepahetseng; boteng ba eona feela ha bo thehe quantification ea litšila.
Haeba mokhoa oa bobeli o senola tlhoro e ncha, boloka kabelo e le ea nakoana ho fihlela bopaki bo tšehetsa boitsebiso ba eona. Chromatogram e rarahaneng e ka ba le tsebo e ngata, empa e ka boela ea bonahatsa tokiso e fetotsoeng kapa ntho e entsoeng ka matsoho. Bapisa mekhoa ea lisampole tse tsamaellanang 'me u ngole lebaka la papiso.
Tse peli tse feto-fetohang: kabelo ea mahloriso e fetola motheo oa papiso
Boloka molumo oa thepa le tharollo ea ho qetela e tsitsitse, empa fetola tsela eo mahloriso a eona a peptide a baloang ka eona. Boleng bo kenyellelitsoeng ho tsoa ho boima ba phofo kaofela bo ka fapana ho e 'ngoe ho ipapisitsoe le litaba tse lekantsoeng tsa peptidic kapa likahare tse ikhethileng.. Ena ke phetoho ea mahloriso a abetsoeng, ha se hakaalo hore ho na le phetoho ea mohlala oa 'mele.
Ho bala hape mahloriso le ho fetola tokiso ke ts'ebetso e fapaneng. Ha re re tharollo e inahaneloang e sa fetoheng qalong e ne e ngotsoe 100 likarolo tsa sepheo ka bongata, empa mosebetsi o tšehelitsoeng oa e ntlafatsa ho 80. Karabelo e tala ha e so fetohe feela hobane lekhalo le fetohile. Karabelo ho yuniti e abetsoeng e se e fapane.
Haeba laboratori e hlapolla tharollo eo ho fihlela mahloriso a macha a boletsoeng, e entse hore ho fetoloe boitokiso ba 'mele hape. Boloka liketsahalo tseo tse peli li fapane tseleng ea tlhahlobo. Ho seng joalo, papiso e ka amahanngoa le "arithmetic relabeling" ho k'hemistri kapa ea nka phokotso ea 'nete e le tokiso ea litokomane feela..
Ka hona, taolo ea mahloriso e lokela ho hlakisa hore na e leka mosebetsi, ts'ebetso ea boitokisetso kapa kamano ea karabelo ea tlhahlobo. Ho pheta palo e ts'oanang ka karoloana e ts'oanang e sa tšehetsoeng e ke ke ea tiisa karolo eo ka boikemelo.
Metsi, counterions, 'me lintho tse setseng li ka tlatsetsa boima bo lekantsoeng. Holim'a moo, tekanyo e bitsoang "net peptide content" e ka kenyelletsa litšila tse amanang le peptide. Kopa mokhoa le tlhaloso ho e-na le ho itšetleha ka leibole. Sephetho se tobileng sepheo le sephetho sa peptide kaofela se hloka litlhaloso tse fapaneng.
Kabelo ea litaba e hloka tekanyo ea 'nete, tlhaloso le phekolo e sebetsang ea litšila. Kabelo e phatlalalitsoeng bakeng sa peptide e 'ngoe e ke ke ea tsebahatsa karoloana ena ea masala a leshome le metso e tšeletseng. Boloka litekanyo tse tlalehiloeng 'me li bonahala ha u bala mahloriso.
Tatelano ea thuto ha e na Trp kapa Tyr, kahoo khakanyo e tloaelehileng e itšetlehileng ka monko oa tsona o nkhang hamonate ka 280 nm ha se kabelo e nepahetseng ea tatellano e ikhethileng. Khetha mokhoa o loketseng bakeng sa peptide ea 'nete le e mahareng ho fapana le ho sebelisa protheine e tloaelehileng. Li-peptide tsa Lyophilized
Sebelisa litšupiso tse loketseng tsa mahloriso kapa tekanyo e ikemetseng ha ho hlokahala. Ho itokisa ho pheta-pheta ho tloha phofo e tšoanang ho ka hlahloba phapang ea ho lokisetsa, empa ha e rarolle phoso e arolelanoeng ho tse nahanoang. Ka ho tšoanang, ho sebelisa HPLC purity factor ho boleng ba litaba bo seng bo ntse bo emetse sepheo se ka balang tokiso ea ho se hloeke habeli..
Haeba karabo ea likokoana-hloko e bapisoa pakeng tsa lihlopha, boloka phapang ena e bonahala. Phetoho e bonahalang karabelong ka 'ngoe ea lebitso la "micromolar concentration" e ka hlaha ho tsoa ho denominator e sebelisitsoeng, le pele o nahana ka baeloji. Netefatsa motheo oa mahloriso pele u amahanya phapang le tšebetso e fetotsoeng ea limolek'hule.
Tse tharo tse feto-fetohang: ho tšoara nako ho ka fetola sampole e lekantsoeng
Lokisetsa li-aliquots tse tsamaellanang, boloka mofuta oa setshelo, mocheso, mahareng, le mokhoa oa ho hlahloba kamehla, le ho fetola nako feela pele ho tlhahlobo. Papiso ena e sebetsana le hore na mohlala o hlahisitsoeng sesebelisoa o lula o lekana nakong eo. Sephetho ke tatellano- le ho itshetleha ka maemo; ha ho nako ea ho ts'oara hohle e ka abeloang mona.
Letšoao le ntseng le fokotseha la sepheo le ka 'na la bonahatsa papatso, pula, phetoho ea lik'hemik'hale, kapa ts'ebetso e tsoelang pele ea sampole. Peresente e tsitsitseng ea bohloeki ba sebaka ha e kenyelle tahlehelo ea peptide haeba likarolo tse setseng tse bonoang li lahlehile ka ho lekana kapa haeba mokhoa o tlaleha hore o amana ho fapana le matšoao a felletseng..
Bakeng sa mohlala o fapaneng oa lipalo, inahanela likarabo tsa pele tse fumanoeng tsa 95 target units le 5 likarolo tsa litšila. Sebaka se lekanyelitsoeng sa sepheo ke 95%. Haeba ka bobeli likarabo hamorao halofo ho 47.5 le 2.5, sebaka se lekanyelitsoeng sa sepheo se ntse se le teng 95% le hoja karabelo e felletseng e ile ea fokotseha ka halofo.
Mohlala ona o iqapetsoeng oa "proportional-tahlehelo" ha o fane ka mochine kapa ho theha lintlha tse lekanang tsa karabelo. E bontša hore na ke hobane'ng ha ho tloaeleha ho palo e hlokometsoeng ho ka pata phetoho e feletseng. Peresente e tsitsitseng e amanang le eona e ke ke ea araba potso e tšoanang le papiso ea ho hlaphoheloa e tšehetsoeng.
Ka lehlakoreng le leng, peresente e fetotsoeng ha ea lokela ho bolela palo e felletseng e fetotsoeng: karolo e ekelitsoeng ea bokamorao e ka fetola denominator. Hlahloba litemoso tse felletseng, Litaolo tse amehang le moelelo oa mokhoa pele ho hlalosa sephetho se amanang. Taolo e nepahetseng e boloka phapang eo tseko ea mahlale e itšetlehileng ka eona. Mofani oa Tripeptide
The Kristensen o ithuta ka li-peptide tse tharo tsa cationic e hlahloba adsorption libakeng tsa laboratori. E etsa hore potso e nepahetseng ea ho hlaphoheloa e konkreite ntle le ho theha sekhahla, mochini kapa sejana se setle ka ho fetesisa bakeng sa sepheo sa ho ruta se pheta-phetoang sa KLAG.
Boloka papiso ea ho tšoara e hokahane le ntlha ea eona ea ho qetela. Sephetho mabapi le lets'oao le ka khutlisoa nakong ea nako e lekiloeng ha se molao oa ho felloa ke nako lefatšeng ka bophara. Kopano ea nako e ka susumetsa papiso e tobileng haholoanyane ntle le ho tseba sesosa.
| Phetoho e le 'ngoe e fetohile | Kutloisiso e lebelletsoeng | Se lokelang ho lula se le teng | Moeli oa ho nahana |
|---|---|---|---|
| Khetho ea Chromatographic | Karohano le bohloeki bo bonahalang ba sebaka bo ka eketseha, fokotseha, kapa a lule a tšoana | Sebopeho sa mohlala, tokisetso, le litlhophiso tsa tlhahlobo tse tlalehiloeng moo ho ka khonehang | Chromatogram e fapaneng feela ha e fane ka bopaki ba sebopeho se fapaneng |
| Motheo oa ho tsepamisa maikutlo | Ponahalo e baliloeng ea sepheo le karabo e tloaelehileng li ka fetoha | Lintho tsa sebele, bophahamo ba modumo, le tekanyo e tala | Phello e itšetlehile ka hore na tekanyo ka 'ngoe ea litaba e kenyelletsa eng |
| Nako ea ho itokisetsa tlhahlobo | Sepheo se ka khutlisoang se ka lula se tsitsitse kapa sa fetoha ka mekhoa ea 'mele kapa ea lik'hemik'hale | Setshelo, mahareng, mocheso, le mokhoa oa ho hlahloba | Mokhatlo oa nako ha o khetholle mokhoa oa tahlehelo |
Hang ha phetoho e se e arotsoe, teko ea bobeli e ka batlisisa mokhoa oa eona. Ho fetola nako ea polokelo, setshelo, solvent, 'me ho tsepamisa mohopolo hammoho ho ka hlahisa liphello tse ntlafetseng ha ho ntse ho sa tsejoe sesosa. Sephetho se joalo se ka ba molemo ts'ebetsong, empa e tshehetsa qeto e fapaneng le papiso e laolehileng ya mofuta o le mong.
COA le rekoto ea anomaly li lokela ho hlahlojoa joang hammoho?
Bala COA e le sete ea lipolelo tse amanang le mekhoa. Sekhetho sa sehlopha se hokahanya tlaleho le vial. Tatelano le lihlopha tsa terminal li hlalosa sepheo se reriloeng. Maemo a HPLC a hlalosa peresente ea sebaka se tlalehiloeng. Tlhaloso ea bongata e sebetsana le sebopeho, mola mokgwa wa diteng o hlalosa bongata. Liphetho tsa metsi kapa counterion li araba lipotso tse ling ha feela li lekantsoe.
Bakeng sa lets'oao le tlase le inahaneloang kamora ho ts'oara, pele netefatsa hore sehlopha se le seng le litaelo tsa tokiso li sebelisitsoe. Hlahloba likheo, boitšoaro ba litšupiso, direkoto tsa dilution, le tshebetso ya diletsa. Ebe u bapisa lisampole tse ncha le tse ts'oeroeng ka tekanyo e khonang ho latella ho hlaphoheloa, ho e-na le ho itšetleha feela ka bohloeki ba sebaka se tloaelehileng.
Haeba tahlehelo e tšehetsoa, batlisisa hore na lintho tse bonahalang li ka fumanoa karolong e arohaneng kapa setshelo le hore na ho hlaha mefuta e mecha ea lik'hemik'hale. Teko ea ho hlaphoheloa e tlameha ho raloa le ho hlalosoa bakeng sa mokhoa oa sebele. Ho hloleha ho bona tlhoro e ncha ka bohona ha ho pakahatse ho ba le bokhabane, hobane dihlahiswa tse ding di ka nna tsa fumanwa hampe kapa di sa rarollwa.
Etsa tlhahlobo e eketsehileng ha boitsebiso bo sa lumellane, tekanyetso ya ditshila eo ho dumellanweng ka yona e hloleha, litekanyo tsa mahloriso ha li lumellane ho feta ho se kholisehe ha tsona ho loketseng, kapa mohlala oa liphetoho tsa boitšoaro nakong ea fensetere e reriloeng ea liteko. Hlalosa mekhoa e nepahetseng le sehlopha sa morero. Se ke oa etsa palo ea ho hloleha ha lipalo ho tsoa ho boemo ba papiso.
LBH: ho khetha li-control bakeng sa tlhahlobo ea peptide ea maiketsetso
Ke peptide ea scrambled ke taolo e felletseng ea boleng? Che. E ka sebetsana le potso e ikhethileng ea baeloji haeba thepa ea eona e loketse, empa ha e netefatse boitsebiso ba peptide ea teko, dikahare, kapa botsitso ba ho tshwara. Tatelano e qaphalelitsoeng ha e sebetse ka bo eona ka bo eona.
Na sekheo sa tlhahlobo se ka paka hore peptide e hloekile? Che. E ka senola semelo, tshilafatso, kapa carryover tlasa maemo a lekiloeng. Ha e thehe karohano ea litšila tse amanang le sepheo kapa boitsebiso ba sebopeho.
Na bohloeki bo sa fetoheng bo bolela ho tsepamisa maikutlo ho sa fetoheng? Che. Bohloeki ba sebaka se amanang le chelete e ka khutlisoang ke litekanyo tse fapaneng. Mohlala o ka lahleheloa ke lisebelisoa ha o ntse o boloka liperesente tse tšoanang tsa sebaka se tlalehiloeng.
Ke taolo efe e lokelang ho eketsoa pele ha liphetho li sa lumellane? Botsa hore na ke tlhokomeliso efe e ka khethollang litlhaloso tse ka sehloohong. Sekheo se se nang letho se ka lekola bokamorao; tšupiso e loketseng e ka hlahloba karolo e hlalositsoeng ea tšebetso ea tekanyo; bopaki bo ikemetseng bo ka sebetsana le boemo ba mahloriso. Ha ho le e 'ngoe e ka nkelang tse ling sebaka.
