الأسئلة المتداولة

ببساطة إلى المعقد من ملليجرام إلى كيلوغرام


طلب عرض أسعار مخصص


How to store peptides?


الببتيدات المجففة بالتجميد

للتخزين طويل الأمد للببتيدات, نوصي بتخزينها كمسحوق صلب. يمكن تخزين الببتيدات المجففة بالتبريد عند -20 درجة مئوية أو أقل مع الحد الأدنى من التحلل. يُنصح العملاء بإعادة فحص الببتيدات المخصصة كل مرة 2 سنوات من تاريخ إصدار مراقبة الجودة.

الببتيدات في الحل

الببتيدات الموجودة في المحلول أقل استقرارًا وعرضة للتدهور. يجب أن تكون المحاليل المائية المستخدمة لإذابة الببتيدات معقمة ونقية.

في الحل, قد تتحلل كمية معينة من الببتيد, اعتمادا على الأحماض الأمينية الموجودة في التسلسل. بعض الأمثلة مذكورة أدناه:
– الببتيدات التي تحتوي على الميثيونين, يجب أن يكون لبقايا السيستين أو التربتوفان وقت تخزين محدود في المحلول بسبب الأكسدة. يجب أن تذوب هذه الببتيدات في مذيب خالي من الأكسجين. –
يمكن إزالة الجلوتامين والأسباراجين من حمض الجلوتاميك وحمض الأسبارتيك, على التوالى. –
يمكن أن يخضع السيستين لدورة مؤكسدة لتكوين رابطة ثاني كبريتيد السيستين-السيستين (والتي يمكن أن تتشكل داخل أو بين روابط ثاني كبريتيد). –
البقايا المشحونة (حمض الأسبارتيك, حمض الجلوتاميك, يسين, أرجينين, الهستيدين) هي استرطابي (امتصاص الماء من الهواء) وتميل إلى تكوين مادة لزجة, زيت واضح. قد لا يؤثر هذا التغيير الجسدي على طبيعة الببتيد. من المستحسن أن يتم تجفيف هذه الببتيدات لإزالة كميات ضئيلة من الماء, ثم يتم تفريغه بالنيتروجين للتأكد من عدم وجود بخار ماء في القارورة, ومن ثم توج بسرعة.

لمنع الأضرار الناجمة عن التجميد والذوبان المتكرر, نوصي المستخدمين بحل كمية الببتيد المطلوبة للتجربة الحالية فقط. يجب تخزين المحلول الزائد عند درجة حرارة ≥ -20 س لحين الحاجة إليها.

تجنب الرطوبة.
لأن الرطوبة تقلل بشكل كبير من ثبات الببتيدات على المدى الطويل, نوصي بموازنة الببتيدات في مجفف إلى درجة حرارة الغرفة قبل فتح القنينات. عند الانتهاء من توزيع الببتيد, يجب تطهير الببتيدات المتبقية في الأنبوب بلطف باستخدام النيتروجين اللامائي, ثم يجب تغطية الحاوية, مختومة مع فيلم الختم, وتخزينها في -20 درجة مئوية.


تختلف خصائص ذوبان الببتيدات المختلفة بشكل كبير. بقايا مثل ألانين (علاء), السيستين (سيس), آيزوليوسين (مع), لوسين (ليو), ميثيونين (التقى), فينيل ألانين (في), وحمض أميني أساسي (فال) إضافة إلى الكارهة للماء والببتيد والذوبان في المحاليل المائية, ومن المستحسن أن يتبع العميل هذه الإرشادات عند تخصيص الببتيدات.

خصائص الذوبان

تعتمد ذوبان الببتيدات بشكل كبير على تسلسل الأحماض الأمينية. الببتيدات الكارهة للماء بشكل طبيعي (أ, ف, ز, V, ل, أنا, م, دبليو, P مع ميل أعلى) تتطلب المذيبات العضوية للذوبان. الببتيدات الحمضية (ميل أعلى لـ D, E في تسلسل الببتيد) تتطلب مخازن مائية أساسية للإذابة, بينما الببتيدات الأساسية (ميل أعلى لـ K, ح, و ر) تتطلب مخازن مائية حمضية للإذابة.

اختيار المذيبات

نظرا للقيود المفروضة على الفحص الخاص بك, نوصي باستخدام الإرشادات التالية لتحديد أفضل مذيب لإذابة الببتيدات

الببتيدات الكارهة للماء

لإعادة إذابة الببتيدات الكارهة للماء, يضيف 100 ميكرولتر من DMSO ويصوتن حتى يتم تشكيل حل متجانس. التالي, أضف المخزن المؤقت الذي تختاره لإنشاء ملف 1 محلول ملغم/مل (كلما زاد تركيز الببتيد, كلما زادت كمية DMSO المطلوبة).

محب للماء (حمضية) الببتيدات

لإعادة إذابة الببتيدات الحمضية, يضيف 100 ميكرولتر من 1% نيو هامبشاير 4 اه ل 1 ملغ من الببتيد والدوامة. بمجرد أن يكون الحل واضحا, أضف المخزن المؤقت الذي تختاره لإنشاء ملف 1 محلول ملغم/مل.

محب للماء (أساسي) الببتيدات

لإعادة تكوين الببتيد الأساسي, أضف الماء المقطر إليه 1 ملغ من الببتيد والدوامة.


معيار الصناعة هو تقديم الببتيدات في شكل مجفف بالتجميد كوزن إجمالي. الوزن الإجمالي الببتيد هو الوزن الإجمالي لجميع المكونات الموجودة في المسحوق المجفف بالتجميد. وهذا يشمل الببتيد للفائدة, أي شوائب الببتيد, ماء, المذيبات المتبقية, والعداد.

على العكس تماما شبكة وزن الببتيد, محسوبة من صافي محتوى الببتيد, هو وزن الببتيد فقط المكون الموجود في المسحوق المجفف بالتجميد. وهذا يوفر تركيزات أكثر دقة لمحاليل الببتيد اللاحقة. لذلك, أوصينا بكميات الوزن الصافي للببتيد الببتيد المخصص طلبات.

صافي محتوى الببتيد التوضيح

صافي محتوى الببتيد يتم إجراء القياس عن طريق تحليل الأحماض الأمينية (AAA; دقة محدودة ولكنها تتطلب كمية مادية منخفضة) أو التحليل العنصري (سي ان; يتطلب ملليغرام من الببتيد ولكنه أكثر دقة). كلا الطريقتين تسفر عن قيمة النسبة المئوية (أي., 75% صافي محتوى الببتيد).

يعتمد صافي محتوى الببتيد على كمية المضاد الموجود*, والذي يعتمد على تسلسل الببتيد. في الأساس, كلما ارتفعت شحنة الببتيد, كلما انخفض محتوى الببتيد

*ملحوظة: يعتمد العنصر المستخدم لحساب محتوى الببتيد الصافي على أيون الببتيد المضاد. يتم ذلك للتأكد من أن الأيون المضاد لا يساهم في كمية محتوى الببتيد. على سبيل المثال, عندما يكون TFA أو الأسيتات هو الأيون المضاد, يتم استخدام النيتروجين لأنه موجود في الببتيد ولكن ليس في TFA أو الأسيتات. يمكن استخدام الكربون أو النيتروجين عندما يكون الكلور هو الأيون المضاد لنفس السبب.

حسابات الوزن الصافي للببتيد:

صافي كمية الببتيد (الببتيد الكلي) - الطريقة التي نستخدمها لصافي طلبات الببتيد المخصصة.

مضاعفة النسبة المئوية لمحتوى الببتيد الصافي (شكل عشري) بواسطة الوزن الإجمالي الببتيد, للحصول على كمية صافي كمية الببتيد (الببتيد الكلي).

على سبيل المثال:
ل 5 ملغ الببتيد الإجمالي / قارورة:
محتوى الببتيد الصافي هو 84%.
الكمية الدقيقة من إجمالي الببتيد = 0.84*5 ملغ = 4.2 ملغ مجموع الببتيد

صافي كمية الببتيد محل الاهتمام - الأكثر دقة - يمكن للعميل استخدام هذه الطريقة بمفرده لحساب الببتيد محل الاهتمام.

اضرب صافي نسبة محتوى الببتيد بالوزن الإجمالي للببتيد, ونقاء الببتيد (بواسطة HPLC), لحساب الكمية الدقيقة من الببتيد الذي تهمك. صافي الببتيد في المئة (شكل عشري) مضروبًا بنقاء الببتيد (شكل عشري).

على سبيل المثال:
ل 5 ملغ الببتيد الإجمالي / قارورة مع:
محتوى الببتيد الصافي هو 84%.
الكمية الدقيقة من الببتيد محل الاهتمام هي = 0.84*0.96*5 ملغ = 4.03 ملغ


تستخدم تغييرات MOL كيمياء Fmoc ذات المرحلة الصلبة بدلاً من كيمياء BOC. تسمح كيمياء Fmoc بإزالة مجموعات الحماية باستخدام ظروف معتدلة أثناء استطالة الببتيد, بينما تتطلب كيمياء BOC استخدام حمض قوي لإزالة مجموعات الحماية أثناء استطالة الببتيد. بالإضافة إلى ذلك, تستخدم كيمياء Fmoc حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (تفا) لإزالة الببتيد من الراتنج, بينما تستخدم كيمياء BOC حمض الهيدروفلوريك (التردد العالي). HF عديم اللون, شديدة التآكل, وسم الاتصال.

لذلك, تستخدم MOL Changes كيمياء Fmoc لأنها أكثر اعتدالًا, مرن, ومتعددة الاستخدامات مقارنة بكيمياء BOC.


تشير المولارية إلى التركيز المولي للمحلول, وهو عدد مولات المذاب المذاب فيه 1 لتر من الحل, معبراً عنه بالمول/لتر, أو م.

المولارية [م] = الكتلة / (الحجم × الكتلة المولية); الخلد = التركيز (جم/لتر) × الحجم (ل)/ميغاواط (جم / مول)

مثال:
منح: 1ملغ من مسحوق الببتيد الجاف مع MW: 20كيلو دالتون (الكتلة المولية للببتيد هي 20 جم / مول)
تحديد المولارية بكتلة معروفة وحجم معروف
للحصول على محلول 1 مل من هذا الببتيد:
المولارية = الكتلة (0.001ز) / (مقدار (0.001ل) × الكتلة المولية (ميغاواط 20,000) = 50 ميكرومتر

لتحديد الكتلة لتحقيق مولية معينة:
إذا لفحصك, أنت بحاجة إلى محلول ببتيد 0.01 مم في 1 مل من الماء, ثم حساب الكتلة المطلوبة على النحو التالي:

الكتلة = المولارية × الحجم × الكتلة المولية
الكتلة = 0.01 مم × (1/1000 ل) × 20000 جم/مول = 0.0002 جم

لذلك, سوف تحتاج إلى 0.2 ملغم/مل من الببتيد للحصول على محلول فعال يبلغ 0.01 ملم.


نقوم بالتوصيل على شكل مسحوق مجفف بالتجميد أو خام ومحلول الببتيد.


تعتمد قابلية ذوبان الببتيد في مذيب معين على تسلسل الأحماض الأمينية وغالباً ما يكون من الصعب التنبؤ بها. في حالة الببتيدات الكتالوج, يتم سرد معلومات الذوبان في ورقة بيانات مراقبة الجودة. للببتيدات المخصصة, يرجى الاطلاع على القسم بعنوان “كيف يجب أن أقوم بإذابة الببتيد الخاص بي”.


محتوى الببتيد ليس مؤشرا على نقاء الببتيد لأن هذين قياسين منفصلين. يتم تحديد النقاء بواسطة HPLC التحليلي ويشير إلى وجود/غياب الملوثات الببتيدية الأخرى (أي. الببتيدات المقطوعة).

يحدد صافي محتوى الببتيد الكمية الفعلية للببتيد (الببتيد محل الاهتمام وكذلك الملوثات الببتيدية) موجودة في العينة. يتم قياس صافي محتوى الببتيد تقليديًا عن طريق تحليل الأحماض الأمينية (AAA; دقة محدودة ولكنها تتطلب كمية منخفضة من المواد) أو التحليل العنصري (سي ان; يتطلب ملليغرام من الببتيد ولكنه أكثر دقة).


تتم تنقية ببتيدات MOL Changes عمومًا بواسطة HPLC التحضيري للمرحلة العكسية, استخدام 2 المخازن المؤقتة التي تحتوي على 0.1% حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (تفا). المخزن المؤقت الأول (المخزن المؤقت أ) يتكون من 0.1 % TFA في الماء منزوع الأيونات والمخزن المؤقت الثاني (المخزن المؤقت ب) يتكون من 0.1 % TFA في الأسيتونيتريل (ACN).

عمومًا, يتم أولاً إذابة الببتيدات الخام في محلول إما المخزن المؤقت A, كمية من المخزن المؤقت B, أو مذيب قطبي عضوي مثل DMSO. إذا تم استخدام مذيب قطبي عضوي أو المخزن المؤقت B, سيتم أولاً تخفيف هذا الحل الواضح باستخدام المخزن المؤقت A. التالي, يتم ترشيح المحلول الببتيدي وتحميله على نظام HPLC التحضيري. استخدام التدرج الأمثل للطريقة, ثم يتم جمع الكسور بناءً على قراءات الامتصاص. يتم بعد ذلك تحليل كل جزء عبر HPLC تحليلي للتأكد من أن نقاء كل جزء يلبي مواصفات النقاء المطلوبة.

يتم بعد ذلك تجميع هذه الأجزاء "النقية" معًا وتجفيفها بالتجميد. يتم بعد ذلك اختبار المسحوق "النقي" للتأكد من نقائه وهويته للتأكد من تصنيع الببتيد الصحيح.

أخيراً, تقوم مجموعة مراقبة الجودة المستقلة في AnaSpec باختبار الببتيد مرة أخرى للتأكد من أن جميع سمات الاختبار تلبي المواصفات المطلوبة.


التسميات الدولية المستخدمة للتسلسل النهائي هي كما يلي:

– نهاية N: H يعني أمين حر (NH2-), Ac يعني الأسيتيل [CH3C(يا)-نيو هامبشاير-], بير يعني حمض البيروجلوتاميك
– محطة C: OH يعني حمض حر (-كوه), NH2 يعني أميد [-CONH2]

– تظهر التعديلات على السلسلة الجانبية للأحماض الأمينية بين قوسين بعد الحمض الأميني المقابل. على سبيل المثال; سيرين فسفرته = S(PO3H2) أو إبسيلون-ن-أسيتيل ليسين = K(مكيف الهواء)


أثناء إنتاج الببتيد, ترتبط الأيونات الموجودة في محاليل التخليق والتنقية بالسلاسل الجانبية للأحماض الأمينية المشحونة من الببتيد, تشكيل الأملاح. تُعرف هذه الأيونات باسم مضادات الببتيد وتساعد في موازنة شحنة الببتيد.

حمض ثلاثي فلورو أسيتيك (تفا) يستخدم عادة في تخليق الببتيد وتنقيته.

وهو يشكل أملاح ثلاثي فلورو أسيتات مع الأحماض الأمينية الأساسية (على سبيل المثال, يسين, أرجينين, الهستيدين) وأمين N- الطرفي الحر. لذلك, عادةً ما يكون ثلاثي فلورو أسيتات هو المضاد الافتراضي.

يتناسب الحد الأدنى لعدد جزيئات TFA المرتبطة بالببتيد مع عدد المخلفات الأساسية في تسلسل الببتيد المحدد. هكذا, البقايا الأساسية الموجودة في الببتيد, كلما انخفض محتوى الببتيد الصافي للمسحوق المجفف بالتجميد. لحساب TFA أو محتوى الماء الموجود في العينة, نوصي بإجراء فحص محتوى الببتيد لكل الببتيد المخصص.

الماء وحمض ثلاثي فلورو أسيتيك (تفا) هي المنتجات الثانوية لعملية التنقية. لكن, قد يثير TFA مخاوف بشأن السمية على قيد الحياة والدراسات قبل السريرية. لذلك, تقدم MOL Changes أسيتات غير سامة, كلوريد, أو مبادلات ملح الأمونيوم.


الببتيدات التي تحتوي على Cys, التقى, أو Trp يمثل تحديًا في تصنيع والحصول على منتجات عالية النقاء. ويرجع ذلك أساسًا إلى عدم الاستقرار والقابلية لأكسدة هذه المجموعات الوظيفية. مطلوب اهتمام خاص لاستخدام وتخزين هذه الببتيدات لتجنب الفتح المتكرر للقوارير.

هل افتقدنا سؤالك? ترك لنا خطا وسوف نقوم بذلك
العودة إلى الداخل 24 ساعات.

 

بيت يبحث واتس اب خدمات منتج