Sviluppo di un ligando peptidico irreversibile radiomarcato per l'imaging PET del fattore di crescita endoteliale vascolare

Gli agenti per l'immagine basati su sonde peptidiche hanno proprietà farmacocinetiche desiderabili a condizione che abbiano elevate affinità per il loro bersaglio in vivo. Un approccio per migliorare l’affinità di un ligando peptidico per il suo bersaglio consiste nel rendere questa interazione covalente e irreversibile. A questo scopo, abbiamo valutato un tag peptidico di affinità marcato con 64Cu, 64Cu-L19K-(5-fluoro-2,4-dinitrobenzene) (64Cu-L19K-FDNB), che si lega covalentemente e irreversibilmente al fattore di crescita dell'endotelio vascolare (VEGF) come agente di imaging PET. Abbiamo confrontato le proprietà in vivo di 64Cu-L19K-FDNB negli xenotrapianti tumorali che esprimono VEGF con i suoi analoghi leganti non covalenti, 64Cu-L19K-(2,4-dinitrofenile) (64Cu-L19K-DNP) e 64Cu-L19K. Metodi: Il peptide L19K (GGNECDIARMWEWECFERK-CONH2) è stato costruito con acido 1,4,7-triazaciclononane-1,4,7-triacetico all'estremità N per la radiomarcatura con 64Cu con uno spaziatore di polietilenglicole tra peptide e chelato. 1,5-il difluoro-2,4-dinitrobenzene è stato coniugato alla lisina C-terminale per la reticolazione con VEGF, risultante in L19K-FDNB. 64Cu-L19K-FDNB è stato analizzato per il legame covalente al VEGF in vitro. Come controllo, L19K è stato coniugato con 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene, risultante in L19K-DNP. Studi di imaging PET e biodistribuzione di 64Cu-L19K-FDNB, 64Cu-L19K-DNP, e il 64Cu-L19K nativo sono stati confrontati negli xenotrapianti HCT-116. Gli studi di blocco di 64Cu-L19K-FDNB sono stati eseguiti con una coiniezione di L19K-FDNB in ​​eccesso non etichettato. Risultati: Studi di legame in vitro hanno confermato il legame covalente e irreversibile di 64Cu-L19K-FDNB a VEGF, mentre 64Cu-L19K-DNP e 64Cu-L19K non si legavano covalentemente. L'imaging PET ha mostrato un assorbimento tumorale più elevato con 64Cu-L19K-FDNB rispetto a 64Cu-L19K-DNP e 64Cu-L19K, con valori medi di assorbimento standardizzati di 0.62 ± 0.05, 0.18 ± 0.06, E 0.34 ± 0.14, rispettivamente, A 24 h dopo l'iniezione (P < 0.05), E 0.53 ± 0.05, 0.32 ± 0.14, E 0.30 ± 0.09, rispettivamente, A 48 h dopo l'iniezione (P < 0.05). Studi di blocco con 64Cu-L19K-FDNB in ​​presenza di un eccesso di peptide non marcato hanno mostrato un 53% riduzione dell'assorbimento del tumore a 48 h dopo l'iniezione. Conclusione: In questo studio dimostrativo, l'uso di un ligando peptidico legante covalente contro il VEGF migliora l'accumulo del tracciante nel sito del tumore in vivo, rispetto ai suoi analoghi peptidici leganti non covalenti. Questa tecnica è uno strumento promettente per migliorare la potenza delle sonde peptidiche come agenti di imaging.