Mokhoa o nepahetseng oa ho qhala ke ntlha ea bohlokoa bakeng sa katleho ea liteko tsa peptide. Ho qhalana ka tsela e fosahetseng ho tla baka tahlehelo ea li-peptide le ho hlōleha ha teko. Leha ho le joalo, Ka linako tse ling ho thata ho fumana mokhoa o nepahetseng oa ho senya. Tse latelang ke mekhoa ea ho qhala e hlahisitsoeng ke lihlopha tse peli tsa tekheniki tsa MOL Changes. mokhoa
MOL E Fetola Tataiso ea Phallo ea Sehlopha sa Theknoloji
Bothata bo ka sehloohong ba ho qhibiliha ha peptide ke ho thehoa ha sebopeho sa bobeli.
Le hoja ho thehoa ha mehaho ea bobeli ea liketane tsa hydrophobic peptide ho hlakile haholoanyane, ntle le liketane tse khutšoane tsa peptide, ketsahalo ena e etsahala hoo e ka bang ka liketane tsohle tsa peptide, ho sa tsotelehe polarity. Ka hona, molao-motheo oa pele oa ho qhala li-polypeptides ke ho sebelisa metsi a hloekisitsoeng a sa hloekang kapa metsi a Deionized (kapa metsi a se nang oksijene haeba maemo a lumela).
Tharollo ea peptide e ka kopana le ho senyeha ha baktheria. Ho qoba ketsahalo ena, peptide e lokela ho qhibiliha ka metsing a hloekisitsoeng a sa hloekang, kapa e tlhotliloeng ka lera la sefene le boholo ba lesoba la 0.45 kapa 0.2 μm bakeng sa ho koala sekheo. Li-polypeptides tse nang le Cys, Kopana, 'me Trp e kotsing haholo ke oxidation, kahoo li lokela ho qhibiliha metsing a se nang oksijene. Metsi a se nang oksijene a ka fumanoa ka ho ntša metsi tlas'a khatello e fokotsehileng ka ho kenya likhase tse sa sebetseng (naetrojene, helium, le argon).
Haeba peptide e sa qhibilihe ka metsing a hloekileng, Kalafo ea ultrasonic e ka thusa ho senya likaroloana le ho eketsa ho qhibiliha. Hlokomela: Kalafo ea Ultrasonic e tla baka ho futhumala ha tharollo le ho senyeha ha peptide.
Haeba peptide e na le li-amino acid tse ngata tsa motheo, sebelisa 1 ~ 10% acetic acid aqueous solution; bakeng sa li-peptide tsa hydrophobic haholo, tshebediso 50% asiti ea acetic.
Haeba polypeptide e na le palo e kholo ea asiti ea amino acid, e ka qhaloa ka a 1 ho 10% tharollo ea ammonia kapa sesebelisoa sa alkaline se feto-fetohang joalo ka ethyl morphine acetate kapa bicarbonate. Boleng ba pH bo tlameha ho fetoloa pele ho chromatography.
Haeba peptide e lokela ho kenngoa kholomong, bokaalo ba sehlapolli sa tlhaho se tlameha ho ba nyane haholo, ho seng joalo nako ea ho boloka e tla ameha haholo.
Haeba polypeptide e na le hydrophobic haholo hobane e na le liketane tse ka thoko tsa hydrocarbon tse kang Val., Leu, Kopana, Phe, Tyr, Ala, etc., kapa ke peptide e sa nke lehlakore, tšebeliso ea li-membrane denaturants tse kang DMF kapa DMSO e ka thusa ho qhaqha polypeptide:
a. Li-denaturants tsa membrane tse phahameng haholo li thusa ho qhaqha polypeptide ka ho senya sebopeho sa eona sa bobeli.
b. Li-denaturants tsa Membrane li loketse ho lokisoa ha tharollo ea tlhahlobo ea peptide, empa e ka kena-kenana le lipatlisiso mabapi le ts'ebetso ea bona ea tlhaho.
c. DMF ke denaturant e ntle ka ho fetisisa (mahloriso a phahameng ka ho fetisisa a ka fihlang 30%), 'me e eketsoa ka ho theoha ho fihlela peptide e qhibiliha.
d. Nakong ea chromatography e fetotsoeng, DMF e tla phalla hammoho le tlhoro e ka pele ea leseli. Ho itšetlehile ka bophahamo ba ente, boleng ba tlhoro bo ka ba holimo haholo. Li-peptide tse ngata li ka lote ka mor'a metsotso e seng mekae ka mor'a palo e kholo ea li-elutes tsa DMF. Haeba ketane ea peptide e nyane mme e hlaha kapele haholo, palo ea peptide e tla fokotseha.
MOL e Fetola Tataiso ea Phallo ea Sehlopha sa Botekgeniki II
Mokhoa oa ho khetholla hore na li-amino acid ha li nke lehlakore, acidic kapa alkaline, le ho bala mokhoa oa ho qhala:
1. Abela e 'ngoe le e' ngoe ea asiti ea amino ka tatellano ea polypeptide ho kenyelletsa aspartic acid Asp (D), asiti ea glutamic (E) le C-terminal carboxyl-COOH joalo ka -1; asiti e 'ngoe le e' ngoe ea mantlha ea amino ho kenyelletsa arginine Arg ( R), lysine Lys (K), histidine ea hae (H) le N-terminal amino-NH2 ba abeloa boleng ba +1; li-amino acid tse sa nke lehlakore 0. E thehiloe holim'a sena, boleng ba polypeptide eohle bo baloa, 'me lintlha ke li-Peptide tse ntle tse nang le lintlha tse mpe li bitsoa li-peptide tsa motheo, ba nang le lintlha tse mpe ba bitsoa li-peptide tse nang le asiti, 'me ba nang le lintlha tsa zero ba bitsoa li-peptide tse sa nke lehlakore.
2. Haeba e le alkaline peptide, leka ho e qhala ka metsi pele; haeba e ke ke ea qhibiliha, leka ho sebelisa 10% - 30% asiti ea acetic; haeba peptide e ntse e sa qhibilihe, leka ho sebelisa pure acetic acid le trifluoroacetic acid TFA (<50 μl) ho e qhaqha, ebe o Hlakola tharollo ea peptide ho mahloriso a lakatsehang.
3. Haeba ke peptide e nang le asiti, leka ho e qhala ka metsi pele; haeba e ke ke ea qhibiliha ka metsi, leka ho sebelisa 13% metsi a ammonia (v/v) ho e qhaqha, le ho hlapolla tharollo ea peptide ho mahloriso a hlokahalang. Haeba tatellano ea peptide e na le cysteine Cys (C), e ke ke ea qhibiliha ka tharollo ea alkaline. Ka kopo, leka mekhoa e ka tlase.
4. Li-peptide tse sa nkeng lehlakore hangata li qhibiliha ka har'a metsoako ea tlhaho. Ea pele, leka ho sebelisa acetonitrile (acetonitrile), kapa methanol (methanol) kapa isopropanol (isopropanol) ho qhaqholla; bakeng sa li-peptide tsa hydrophobic haholo, qhaqha pele ka tekanyo e nyenyane ea dimethyl sulfoxide (DMSO) le ho hlapolla ka metsi ho tsepamisa mohopolo o Hlokehang; haeba tatellano ea peptide e na le cysteine Cys (C), sebelisa dimethylformamide (DMF) kapa N-methylpyrrolidone (NMP) bakeng sa ho qhala. Bakeng sa li-peptide tse tloaetseng ho kopana, qala ka ho eketsa 6M guanidine·HCl kapa 8M urea (Urea) ho di qhala, ebe o li hlapolla ho isa tekanyong e hlokahalang.
hlakisa:
1. E le ho nolofatsa polokelo le tšebeliso e latelang, e kgothaletswa ho qhala peptide ho ea mahloriso a hoo e ka bang 1-2 mg/ml.
2. Peptide e tloaelehileng ea phofo e omisitsoeng e ka bolokoa ho -20°C nako e fetang selemo. Bakeng sa li-peptide tse qhibilihisitsoeng, e kgothaletswa ho aliquot le ho boloka ho -20°C; haeba tatellano ea peptide e na le methionine Met (M), cysteine e nang le asiti (C) kapa tyrosine Tyr (Y) e khothalletsoa ho bolokoa sebakeng se se nang oksijene ho thibela oxidation.
Lethathamo la amino acid le kenyellelitsoeng:
1.Li-amino acid tse sa nke lehlakore: glycine, alanine, leucine, isoleucine, valine, cysteine, methionine, threonine, serine, phenylalanine, tyrosine, tryptophan acid, proline, Asparagine le glutamine
Ftse jang: Mofuta ona oa molek'hule oa amino acid o na le sehlopha se le seng feela sa amino le sehlopha se le seng sa carboxyl
2.Li-amino acid tse nang le asiti: asiti ea glutamic, asiti ea aspartic
Likaroloana: Mofuta ona oa molek'hule oa amino acid o na le sehlopha se le seng sa amino le lihlopha tse peli tsa carboxyl
3.Li-amino acid tsa motheo: lysine, arginine, histidine
Likaroloana: Mofuta ona oa amino acid o na le sehlopha sa diaminocarboxyl molek'hule ea eona; histidine e na le selikalikoe sa naetrojene 'me e fokola ka alkaline, hape ke amino acid ea motheo.
