Veelgestelde vragen
Eenvoudig tot complex van milligram tot kilogram
Aangepaste offerteaanvraag
How to store peptides?
Gevriesdroogde peptiden
Voor langdurige opslag van peptiden, wij raden aan ze als vast poeder te bewaren. Gelyofiliseerde peptiden kunnen bij -20°C of lager worden bewaard met minimale afbraak. Klanten wordt geadviseerd om aangepaste peptiden elke keer opnieuw te inspecteren 2 jaar vanaf de datum van vrijgave van de kwaliteitscontrole.
Peptiden in oplossing
Peptiden in oplossing zijn minder stabiel en vatbaar voor afbraak. Waterige oplossingen die worden gebruikt om peptiden op te lossen, moeten steriel en zuiver zijn.
In oplossing, een bepaalde hoeveelheid peptide kan worden afgebroken, afhankelijk van de aminozuren die in de sequentie aanwezig zijn. Enkele voorbeelden vindt u hieronder:
– Peptiden die methionine bevatten, cysteïne- of tryptofaanresiduen zouden vanwege oxidatie een beperkte bewaartijd in oplossing moeten hebben. Deze peptiden moeten worden opgelost in een zuurstofvrij oplosmiddel. –
Glutamine en asparagine kunnen worden gedeamideerd tot glutaminezuur en asparaginezuur, respectievelijk. –
Cysteïne kan oxidatieve cyclisatie ondergaan om een cysteïne-cysteïne-disulfidebinding te vormen (die binnen of tussen disulfidebindingen kunnen worden gevormd). –
De geladen resten (asparaginezuur, glutaminezuur, lysine, arginine, histidine) zijn hygroscopisch (water uit de lucht opnemen) en hebben de neiging een stroperige massa te vormen, heldere olie. Deze fysieke verandering heeft mogelijk geen invloed op de aard van het peptide. Het wordt aanbevolen dergelijke peptiden te lyofiliseren om sporenhoeveelheden water te verwijderen, vervolgens ontgast met stikstof om ervoor te zorgen dat er geen waterdamp in de injectieflacon zit, en dan snel afgetopt.
Om schade door herhaaldelijk invriezen en ontdooien te voorkomen, we raden gebruikers aan alleen de hoeveelheid peptide op te lossen die nodig is voor het huidige experiment. Overtollige oplossing moet worden bewaard bij ≥ -20 o C totdat het nodig is.
Vermijd vocht.
Omdat vocht de stabiliteit van peptiden op lange termijn aanzienlijk vermindert, wij raden aan om de peptiden in een exsiccator op kamertemperatuur te laten komen voordat u de flesjes opent. Na voltooiing van de peptidedosering, de resterende peptiden in de buis moeten voorzichtig worden gespoeld met watervrije stikstof, dan moet de container worden afgedekt, verzegeld met een afdichtingsfolie, en bewaard bij -20°C.
De oplosbaarheidskenmerken van verschillende peptiden variëren aanzienlijk. Residuen zoals alanine (Helaas), cysteïne (Cys), isoleucine (Met), leucine (Leu), methionine (Ontmoet), fenylalanine (Ph), en valine (Val) dragen bij aan de hydrofobiciteit en oplosbaarheid van het peptide in waterige oplossingen, en het wordt aanbevolen dat de klant deze richtlijnen volgt bij het aanpassen van peptiden.
Oplosbaarheidseigenschappen
De oplosbaarheid van peptiden is sterk afhankelijk van de aminozuursequentie. Natuurlijk hydrofobe peptiden (A, F, G, V, L, I, M, W, P met hogere neiging) hebben organische oplosmiddelen nodig voor het oplossen. Zure peptiden (hogere neiging tot D, E in de peptidesequentie) vereisen basische waterige buffers voor solubilisatie, terwijl basische peptiden (hogere neiging tot K, H, en R) vereisen zure waterige buffers voor solubilisatie.
Oplosmiddel selectie
Gezien de beperkingen van uw test, wij raden aan de volgende richtlijnen te gebruiken om het beste oplosmiddel voor het oplosbaar maken van peptiden te bepalen
Hydrofobe peptiden
Om hydrofobe peptiden opnieuw op te lossen, toevoegen 100 µL DMSO en soniceer totdat een homogene oplossing is gevormd. Volgende, voeg de buffer van uw keuze toe om een 1 mg/ml oplossing (hoe hoger de peptideconcentratie, hoe groter de hoeveelheid DMSO die nodig is).
Hydrofiel (Zuur) Peptiden
Om zure peptiden opnieuw op te lossen, toevoegen 100 µL van 1% NH 4 O naar 1 mg peptide en vortex. Zodra de oplossing helder is, voeg de buffer van uw keuze toe om een 1 mg/ml oplossing.
Hydrofiel (Basis) Peptiden
Om een basisch peptide te reconstitueren, voeg gedestilleerd water toe 1 mg peptide en vortex.
Wat is het verschil tussen netto versus bruto peptidegewicht?
De industriestandaard is om peptiden in gelyofiliseerde vorm als brutogewicht te leveren. Bruto peptidegewicht is het totale gewicht van alle componenten die aanwezig zijn in het gelyofiliseerde poeder. Dit omvat het peptide van interesse, eventuele peptideonzuiverheden, water, resterende oplosmiddelen, en tegenion.
Integendeel Netto peptide gewicht, berekend vanaf de Netto peptidegehalte, is het gewicht van alleen het peptide component aanwezig in het gelyofiliseerde poeder. Dit biedt nauwkeurigere concentraties van uw volgende peptideoplossingen. Vandaar, waarvoor wij netto peptidegewichtshoeveelheden hebben aanbevolen Aangepast peptide bestellingen.
Netto peptidegehalte de meting wordt uitgevoerd door aminozuuranalyse (AAA; beperkte nauwkeurigheid maar vereist een lage materiaalhoeveelheid) of elementaire analyse (CHN; vereist milligram peptide, maar is nauwkeuriger). Beide methoden leveren een procentuele waarde op (d.w.z., 75% netto peptidegehalte).
Het netto peptidegehalte is afhankelijk van de hoeveelheid aanwezig tegenion*, die afhankelijk is van de peptidesequentie. In wezen, hoe hoger de peptidelading, hoe lager het peptidegehalte
*Opmerking: Het element dat wordt gebruikt om het netto peptidegehalte te berekenen, is gebaseerd op het peptide-tegenion. Dit wordt gedaan om ervoor te zorgen dat het tegenion niet bijdraagt aan de hoeveelheid peptidegehalte. Bijvoorbeeld, wanneer TFA of acetaat het tegenion zijn, Er wordt stikstof gebruikt omdat het in het peptide wordt aangetroffen, maar niet in TFA of acetaat. Koolstof of stikstof kunnen om dezelfde reden worden gebruikt als chloride het tegenion is.
Berekeningen van netto peptidegewicht:
Netto peptidehoeveelheid (totaal peptide) - methode die we gebruiken voor netto aangepaste peptidebestellingen.
Vermenigvuldig het percentage netto peptidegehalte (decimale vorm) door het brutogewicht van de peptiden, om de hoeveelheid netto peptidehoeveelheid te verkrijgen (totaal peptide).
Bijvoorbeeld:
Voor 5 mg bruto peptide/flesje:
Netto peptidegehalte is 84%.
Exacte hoeveelheid totaal peptide = 0.84*5 mg=4,2 mg totaal peptide
Netto peptide van belang Hoeveelheid – meest nauwkeurig — de klant kan deze methode zelf gebruiken om het betreffende peptide te berekenen.
Vermenigvuldig het percentage netto peptidegehalte met het brutogewicht van de peptiden, en de peptidezuiverheid (door HPLC), om de exacte hoeveelheid van het gewenste peptide te berekenen. Het netto peptidepercentage (decimale vorm) wordt vermenigvuldigd met de zuiverheid van het peptide (decimale vorm).
Bijvoorbeeld:
Voor 5 mg bruto peptide/flesje met:
Netto peptidegehalte is 84%.
De exacte hoeveelheid peptide van belang is = 0.84*0.96*5 mg = 4,03 mg
MOL Changes maakt gebruik van vaste fase Fmoc-chemie in plaats van BOC-chemie. Fmoc-chemie maakt de verwijdering van beschermende groepen mogelijk onder milde omstandigheden tijdens peptide-verlenging, terwijl de BOC-chemie het gebruik van een sterk zuur vereist om de beschermende groepen tijdens peptide-verlenging te verwijderen. Aanvullend, Fmoc-chemie maakt gebruik van trifluorazijnzuur (TFA) om het peptide uit de hars te verwijderen, terwijl de BOC-chemie fluorwaterstofzuur gebruikt (HF). HF is kleurloos, zeer corrosief, en een contactgif.
Daarom, MOL Changes maakt gebruik van Fmoc-chemie omdat deze milder is, flexibele, en veelzijdig vergeleken met BOC-chemie.
Hoe bereken ik de molariteit van mijn peptide?
Molariteit verwijst naar de molaire concentratie van een oplossing, dat is het aantal mol opgeloste stof 1 liter oplossing, uitgedrukt als mol/L, of M.
Molariteit [M] = Massa / (Volume x molaire massa); Mol = Concentratie (g/L) x Volume (L)/Mw (g/mol)
Voorbeeld:
Gegeven: 1mg droog peptidepoeder met MW: 20KDa (De molaire massa van het peptide is 20 g/mol)
Om de molariteit te bepalen met bekende massa en bekend volume
Voor een oplossing van 1 ml van dit peptide:
Molariteit = Massa (0.001G) / (volume (0.001L) x Molaire massa (Mw 20,000) = 50 µM
Massa bepalen om een bepaalde molariteit te bereiken:
Als het om uw analyse gaat, je hebt 0,01 mM werkende peptide-oplossing nodig in 1 ml water, bereken vervolgens de vereiste massa als volgt:
Massa = Molariteit x Volume x Molaire Massa
Massa = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20.000 g/mol = 0,0002 g
Vandaar, je hebt 0,2 mg/ml peptide nodig om een werkende oplossing van 0,01 mM te krijgen.
In welke vorm worden peptiden geleverd?
Wij leveren als gevriesdroogde of ruwe poeder- en peptideoplossing.
Hoe weet ik of mijn peptide oplosbaar zal zijn??
De oplosbaarheid van een peptide in een bepaald oplosmiddel is afhankelijk van de aminozuursequentie en vaak moeilijk te voorspellen. In het geval van cataloguspeptiden, de oplosbaarheidsinformatie staat vermeld op het QC-gegevensblad. Voor aangepaste peptiden, zie het gedeelte met de titel “Hoe moet ik mijn peptide oplossen”.
Wat is het verschil tussen peptidegehalte en peptidezuiverheid?
Het peptidegehalte is geen indicatie voor de zuiverheid van het peptide, aangezien dit twee afzonderlijke metingen zijn. De zuiverheid wordt bepaald door analytische HPLC en geeft de aanwezigheid/afwezigheid van andere peptideverontreinigingen aan (d.w.z. afgeknotte peptiden).
Het netto peptidegehalte bepaalt de werkelijke hoeveelheid van het peptide (peptide van belang, evenals de peptideverontreinigingen) aanwezig in het monster. Het netto peptidegehalte wordt traditioneel gemeten door aminozuuranalyse (AAA; beperkte nauwkeurigheid, maar vereist een lage hoeveelheid materiaal) of elementaire analyse (CHN; vereist milligram peptide, maar is nauwkeuriger).
Hoe zuivert u over het algemeen uw peptiden??
MOL Changes-peptiden worden over het algemeen gezuiverd door preparatieve omgekeerde fase-HPLC, gebruiken 2 buffers bevatten 0.1% trifluorazijnzuur (TFA). De eerste buffer (Buffer A) bestaat uit 0.1 % TFA in gedeïoniseerd water en de tweede buffer (Buffer B) bestaat uit 0.1 % TFA in acetonitril (ACN).
Algemeen, ruwe peptiden worden eerst opgelost in een oplossing van Buffer A, een bepaalde hoeveelheid buffer B, of een organisch polair oplosmiddel zoals DMSO. Als een organisch polair oplosmiddel of buffer B werd gebruikt, deze heldere oplossing wordt eerst verdund met buffer A. Volgende, de peptideoplossing wordt gefiltreerd en op het preparatieve HPLC-systeem geladen. Gebruikmakend van een geoptimaliseerde methodegradiënt, fracties worden vervolgens verzameld op basis van de absorptiemetingen. Elke fractie wordt vervolgens geanalyseerd via een analytische HPLC om ervoor te zorgen dat de zuiverheid van elke fractie voldoet aan de vereiste zuiverheidsspecificatie.
Deze ‘zuivere’ fracties worden vervolgens samengevoegd en gelyofiliseerd. Het “pure” poeder wordt vervolgens getest op zowel zuiverheid als identiteit om er zeker van te zijn dat het juiste peptide is vervaardigd.
Eindelijk, een onafhankelijke QC-groep bij AnaSpec test het peptide opnieuw om ervoor te zorgen dat alle testkenmerken aan de vereiste specificaties voldoen.
Hoe schrijf ik mijn peptidesequentietermini?
De internationale nomenclatuur die voor de sequentie-uiteinden wordt gebruikt, is als volgt:
– N-terminus: H betekent vrij amine (NH2-), Ac betekent acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr betekent pyroglutaminezuur
– C-terminal: OH betekent vrij zuur (-COOH), NH2 betekent amide [-CONH2]
– Modificaties aan de zijketen van aminozuren worden tussen haakjes weergegeven na het overeenkomstige aminozuur. Bijvoorbeeld; gefosforyleerde serine = S(PO3H2) of epsilon-N-geacetyleerde lysine = K(Ac)
Tijdens de peptideproductie, ionen in de synthese- en zuiveringsoplossingen binden aan de geladen aminozuurzijketens van het peptide, zouten vormen. Deze ionen staan bekend als peptide-tegenionen en helpen de lading van het peptide in evenwicht te brengen.
Trifluorazijnzuur (TFA) wordt vaak gebruikt bij peptidesynthese en -zuivering.
Het vormt trifluoracetaatzouten met basische aminozuren (bijv., lysine, arginine, histidine) en het vrije N-terminale amine. Daarom, trifluoracetaat is doorgaans het standaardtegenion.
Het minimale aantal TFA-moleculen gebonden aan een peptide is evenredig met het aantal basische residuen in een gegeven peptidesequentie. Dus, de meer basische residuen die in een peptide aanwezig zijn, hoe lager het netto peptidegehalte van het gelyofiliseerde poeder. Om rekening te houden met het TFA- of watergehalte dat in het monster aanwezig is, we raden aan om voor elk aangepast peptide een peptidegehaltetest uit te voeren.
Water en trifluorazijnzuur (TFA) zijn bijproducten van het zuiveringsproces. Echter, TFA kan toxiciteitsproblemen veroorzaken in leven en preklinische onderzoeken. Daarom, MOL Changes biedt niet-giftig acetaat, chloride, of ammoniumzoutwisselaars.
hy zijn peptiden die Cys bevatten, Ontmoet, of Trp moeilijk te synthetiseren?
Peptiden die Cys bevatten, Ontmoet, of Trp zijn een uitdaging om producten met een hoge zuiverheid te synthetiseren en te verkrijgen. Dit komt voornamelijk door de instabiliteit en gevoeligheid voor oxidatie van deze functionele groepen. Speciale aandacht is vereist voor het gebruik en de opslag van deze peptiden om herhaaldelijk openen van de injectieflacons te voorkomen.
Hebben wij uw vraag gemist?? Stuur ons een bericht en dat zullen wij ook doen
ga weer naar binnen 24 uur.
