Vanliga frågor

Helt enkelt till komplext från milligram till kilogram

Anpassad offertförfrågan


How to store peptides?

Lyofiliserade peptider

För långtidslagring av peptider, vi rekommenderar att de lagras som ett fast pulver. Lyofiliserade peptider kan förvaras vid -20°C eller lägre med minimal nedbrytning. Kunder rekommenderas att återinspektera anpassade peptider varje 2 år från datumet för kvalitetskontroll.

Peptider i lösning

Peptider i lösning är mindre stabila och benägna att brytas ned. Vattenlösningar som används för att lösa upp peptider bör vara sterila och rena.

I lösning, en viss mängd peptid kan brytas ned, beroende på vilka aminosyror som finns i sekvensen. Några exempel listas nedan:
– Peptider som innehåller metionin, cystein- eller tryptofanrester bör ha begränsad lagringstid i lösning på grund av oxidation. Dessa peptider bör lösas i ett syrefritt lösningsmedel. –
Glutamin och asparagin kan deamideras till glutaminsyra och asparaginsyra, respektive. –
Cystein kan genomgå oxidativ cyklisering för att bilda en cystein-cysteindisulfidbindning (som kan bildas inom eller mellan disulfidbindningar). –
De laddade resterna (asparaginsyra, glutaminsyra, lysin, arginin, histidin) är hygroskopiska (absorberar vatten från luften) och tenderar att bilda en viskös, klar olja. Denna fysiska förändring kanske inte påverkar peptidens natur. Det rekommenderas att sådana peptider lyofiliseras för att avlägsna spårmängder av vatten, avgasas sedan med kväve för att säkerställa att det inte finns någon vattenånga i flaskan, och sedan snabbt taket.

För att förhindra skador från upprepad frysning och upptining, vi rekommenderar att användare endast löser upp den mängd peptid som krävs för det aktuella experimentet. Överskott av lösning ska förvaras vid ≥ -20 o C tills det behövs.

Undvik fukt.
Eftersom fukt avsevärt minskar den långsiktiga stabiliteten av peptider, vi rekommenderar att utjämna peptiderna i en exsickator till rumstemperatur innan flaskorna öppnas. Efter avslutad peptiddispensering, de återstående peptiderna i röret ska försiktigt rengöras med vattenfritt kväve, då ska behållaren vara försluten, förseglad med en tätningsfilm, och förvaras vid -20°C.

Hur löser man upp peptider?

Löslighetsegenskaperna för olika peptider varierar avsevärt. Rester som alanin (Ala), cystein (Cys), isoleucin (Med), leucin (Leu), metionin (Träffade), fenylalanin (Phe), och valin (Val) lägga till peptidens hydrofobicitet och löslighet i vattenlösningar, och det rekommenderas att kunden följer dessa riktlinjer vid anpassning av peptider.

Löslighetsegenskaper

Lösligheten av peptider är starkt beroende av aminosyrasekvensen. Naturligt hydrofoba peptider (A, F, G, V, L, jag, M, W, P med högre benägenhet) kräver organiska lösningsmedel för solubilisering. Sura peptider (högre benägenhet för D, E i peptidsekvensen) kräver basiska vattenhaltiga buffertar för solubilisering, medan grundläggande peptider (högre benägenhet för K, H, och R) kräver sura vattenhaltiga buffertar för solubilisering.

Val av lösningsmedel

Med tanke på begränsningarna i din analys, vi rekommenderar att du använder följande riktlinjer för att bestämma det bästa lösningsmedlet för att solubilisera peptider

Hydrofoba peptider

För att återsolubilisera hydrofoba peptider, tillägga 100 µL DMSO och sonikera tills en homogen lösning bildas. Nästa, lägg till valfri buffert för att göra en 1 mg/ml lösning (ju högre peptidkoncentration, desto större mängd DMSO krävs).

Hydrofil (Surt) Peptider

För att återsolubilisera sura peptider, tillägga 100 µL av 1% NH 4 ÅH till 1 mg peptid och vortex. När lösningen är klar, lägg till valfri buffert för att göra en 1 mg/ml lösning.

Hydrofil (Grundläggande) Peptider

För att rekonstituera en basisk peptid, tillsätt destillerat vatten 1 mg peptid och vortex.

Vad är skillnaden mellan netto och brutto peptidvikt?

Branschstandarden är att leverera peptider i lyofiliserad form som bruttovikt. Brutto peptidvikt är den totala vikten av alla komponenter som finns i det lyofiliserade pulvret. Detta inkluderar peptiden av intresse, eventuella peptidföroreningar, vatten, kvarvarande lösningsmedel, och motjon.

Tvärtom Netto peptidvikt, räknat från Netto peptidinnehåll, är vikten av bara peptiden komponent som finns i det lyofiliserade pulvret. Detta ger mer exakta koncentrationer av dina efterföljande peptidlösningar. Därför, vi rekommenderade netto peptidviktsbelopp för Anpassad peptid order.

Nettpeptidinnehåll mätning utförs genom aminosyraanalys (AAA; begränsad noggrannhet men kräver en låg materialmängd) eller elementaranalys (CHN; kräver milligram peptid men är mer exakt). Båda metoderna ger ett procentuellt värde (dvs., 75% nettoinnehåll av peptider).

Nettpeptidinnehållet beror på mängden motjon som finns*, vilket är beroende av peptidsekvensen. Väsentligen, ju högre peptidladdning, desto lägre peptidhalt

*Notera: Elementet som används för att beräkna nettopeptidinnehållet är baserat på peptidmotjonen. Detta görs för att säkerställa att motjonen inte bidrar till mängden peptidinnehåll. Till exempel, när TFA eller acetat är motjonen, kväve används eftersom det finns i peptiden men inte i TFA eller acetat. Kol eller kväve kan användas när klorid är motjonen av samma anledning.

Nettopeptidviktsberäkningar:

Netto peptidkvantitet (total peptid) — metod vi använder för anpassade nettobeställningar av peptider.

Multiplicera nettopeptidinnehållsprocenten (decimalform) av peptidens bruttovikt, för att erhålla mängden nettopeptidkvantitet (total peptid).

Till exempel:
För 5 mg brutto peptid/flaska:
Peptid nettoinnehåll är 84%.
Exakt mängd total peptid = 0.84*5 mg=4,2 mg total peptid

Netto peptid av intresse kvantitet – mest exakt — Kunden kan använda denna metod på egen hand för att beräkna den intressanta peptiden.

Multiplicera netto peptidinnehåll i procent med peptidens bruttovikt, och peptidrenheten (genom HPLC), för att beräkna den exakta mängden av peptiden av intresse du har. Netto peptidprocent (decimalform) multipliceras med peptidrenhet (decimalform).

Till exempel:
För 5 mg brutto peptid/flaska med:
Peptid nettoinnehåll är 84%.
Exakt mängd peptid av intresse är = 0.84*0.96*5 mg=4,03 mg

Vilken typ av kemi använder du?

MOL Changes använder fastfas Fmoc-kemi snarare än BOC-kemi. Fmoc-kemi möjliggör avlägsnande av skyddsgrupper med milda förhållanden under peptidförlängning, medan BOC-kemi kräver användning av en stark syra för att ta bort skyddsgrupperna under peptidförlängning. Dessutom, Fmoc-kemi använder trifluorättiksyra (TFA) för att avlägsna peptiden från hartset, medan BOC-kemi använder fluorvätesyra (HF). HF är färglös, mycket frätande, och ett kontaktgift.

Därför, MOL Changes använder Fmoc-kemi eftersom den är mildare, flexibel, och mångsidig jämfört med BOC-kemi.

Hur beräknar jag molariteten för min peptid?

Molaritet hänvisar till den molära koncentrationen av en lösning, vilket är antalet mol löst ämne löst i 1 liter lösning, uttryckt som mol/L, eller M.

Molaritet [M] = Mässa / (Volym x molmassa); Mullvad = Koncentration (g/L) x Volym (L)/MW (g/mol)

Exempel:
Given: 1mg torrt peptidpulver med MW: 20KDa (Molar massa av peptid är 20 g/mol)
Att bestämma molaritet med känd massa och känd volym
För en 1 ml lösning av denna peptid:
Molaritet = massa (0.001g) / (volym (0.001L) x Molar massa (MW 20,000) = 50 µM

Att bestämma massa för att uppnå en viss molaritet:
Om för din analys, du behöver 0,01 mM fungerande peptidlösning i 1 ml vatten, beräkna sedan den nödvändiga massan enligt följande:

Massa = Molaritet x Volym x Molar Mass
Massa = 0,01 mM x (1/1000 L) x 20 000 g/mol = 0,0002 g

Därför, du behöver 0,2 mg/ml peptid för att få en fungerande lösning på 0,01 mM.

I vilken form levereras peptider?

Vi levererar som lyofiliserat eller råpulver och peptidlösning.

Hur vet jag om min peptid kommer att vara löslig?

Lösligheten av en peptid i ett givet lösningsmedel är beroende av aminosyrasekvensen och ofta svår att förutsäga. I fallet med katalogpeptider, löslighetsinformationen finns på QC-databladet. För anpassade peptider, se avsnittet med rubriken “Hur ska jag solubilisera min peptid”.

Vad är skillnaden mellan peptidinnehåll och peptidrenhet?

Peptidhalten är inte en indikation på peptidrenheten eftersom dessa är två separata mätningar. Renhet bestäms med analytisk HPLC och indikerar närvaro/frånvaro av andra peptidföroreningar (dvs. trunkerade peptider).

Netto peptidhalt bestämmer den faktiska mängden av peptiden (peptid av intresse såväl som peptidföroreningarna) finns i provet. Nettohalten av peptider mäts traditionellt med aminosyraanalys (AAA; begränsad noggrannhet men kräver en liten mängd material) eller elementaranalys (CHN; kräver milligram peptid men är mer exakt).

Hur renar du generellt dina peptider?

MOL Changes-peptider renas i allmänhet genom preparativ HPLC i omvänd fas, använder 2 buffertar innehållande 0.1% trifluorättiksyra (TFA). Den första bufferten (Buffert A) är sammansatt av 0.1 % TFA i avjoniserat vatten och den andra bufferten (Buffert B) är sammansatt av 0.1 % TFA i acetonitril (ACN).

I allmänhet, orena peptider löses först i en lösning av antingen buffert A, en viss mängd buffert B, eller ett organiskt polärt lösningsmedel såsom DMSO. Om ett organiskt polärt lösningsmedel eller buffert B användes, denna klara lösning späds först med buffert A. Nästa, peptidlösningen filtreras och laddas på det preparativa HPLC-systemet. Använder en optimerad metodgradient, fraktioner samlas sedan upp baserat på absorbansavläsningarna. Varje fraktion analyseras sedan via en analytisk HPLC för att säkerställa att renheten för varje fraktion uppfyller den erforderliga renhetsspecifikationen.

Dessa "rena" fraktioner slås sedan samman och lyofiliseras. Det "rena" pulvret testas sedan för både renhet och identitet för att säkerställa att rätt peptid har tillverkats.

Slutligen, en oberoende QC-grupp på AnaSpec testar igen peptiden för att säkerställa att alla testattribut uppfyller de nödvändiga specifikationerna.

Hur skriver jag mina peptidsekvenstermini?

Den internationella nomenklaturen som används för sekvenstermini är som följer:

– N-terminal: H betyder fri amin (NH2-), Ac betyder acetyl [CH3C(O)-NH-], Pyr betyder pyroglutaminsyra
– C-terminal: OH betyder fri syra (-COOH), NH2 betyder amid [-CONH2]

– Modifieringar på sidokedjan av aminosyror är avbildade inom parentes efter motsvarande aminosyra. Till exempel; fosforylerat serin = S(PO3H2) eller epsilon-N-acetylerat lysin = K(Ac)

Vad är en peptidmotjon?

Under peptidproduktion, joner i syntes- och reningslösningarna binder till de laddade aminosyrasidokedjorna i peptiden, bildar salter. Dessa joner är kända som peptidmotjoner och hjälper till att balansera peptidens laddning.

Trifluorättiksyra (TFA) används ofta vid peptidsyntes och rening.

Det bildar trifluoracetatsalter med basiska aminosyror (till exempel, lysin, arginin, histidin) och den fria N-terminala aminen. Därför, trifluoracetat är vanligtvis standardmotjonen.

Det minsta antalet TFA-molekyler bundna till en peptid är proportionellt mot antalet basiska rester i en given peptidsekvens. Således, de mer basiska resterna som finns i en peptid, desto lägre nettopeptidhalt i det lyofiliserade pulvret. För att ta hänsyn till TFA eller vattenhalt som finns i provet, vi rekommenderar att du utför en analys av peptidinnehållet för varje anpassad peptid.

Vatten och trifluorättiksyra (TFA) är biprodukter från reningsprocessen. Dock, TFA kan ge upphov till toxicitetsproblem för levande och prekliniska studier. Därför, MOL Changes erbjuder giftfritt acetat, klorid, eller ammoniumsaltbytare.

hy är peptider som innehåller Cys, Träffade, eller Trp svår att syntetisera?

Peptider innehållande Cys, Träffade, eller Trp är utmanande att syntetisera och få produkter med hög renhet. Detta beror främst på instabiliteten och känsligheten för oxidation av dessa funktionella grupper. Särskild uppmärksamhet krävs vid användning och förvaring av dessa peptider för att undvika upprepad öppning av flaskorna.

Missade vi din fråga? Skriv till oss och vi kommer
komma tillbaka inom 24 timmar.