Соответствующий метод растворения является важным фактором успеха экспериментов с пептидами.. Неправильное растворение приведет к потере пептидов и провалу эксперимента.. Однако, найти идеальный метод растворения иногда бывает довольно сложно. Ниже приведены методы растворения, предложенные двумя техническими группами MOL Changes.. метод
Руководство по роспуску технологической группы MOL Changes
Основной проблемой растворения пептидов является образование вторичной структуры..
Хотя более очевидно образование вторичных структур гидрофобных пептидных цепей., за исключением самых коротких пептидных цепей, это явление происходит почти во всех пептидных цепях, независимо от полярности. Поэтому, Первый принцип растворения полипептидов – использование стерильной дистиллированной или деионизированной воды. (или бескислородная вода, если позволяют условия).
Пептидный раствор может подвергаться бактериальному разложению.. Чтобы избежать этого явления, пептид следует растворить в стерильной дистиллированной воде., или фильтруют с помощью фильтрующей мембраны с размером пор 0.45 или 0.2 мкм для стерилизации. Полипептиды, содержащие Cys, Встретились, и Trp особенно чувствительны к окислению., поэтому их следует растворять в бескислородной воде. Бескислородную воду можно получить путем дегазации при пониженном давлении путем вдувания инертных газов. (азот, гелий, и аргон).
Если пептид нерастворим в чистой воде, ультразвуковая обработка может помочь разрушить частицы и повысить растворимость. Примечание: Ультразвуковая обработка вызовет нагревание раствора и деградацию пептида..
Если пептид содержит несколько основных аминокислот, используйте 1~10% водный раствор уксусной кислоты; для очень гидрофобных пептидов, использовать 50% уксусная кислота.
Если полипептид содержит большое количество кислых аминокислот, его можно растворить в 1 к 10% раствор аммиака или летучий щелочной буфер, такой как этилморфинацетат или бикарбонат.. Значение pH необходимо отрегулировать перед хроматографией..
Если пептид необходимо загрузить в колонку, количество органического растворителя должно быть очень небольшим, в противном случае время хранения будет серьезно затронуто.
Если полипептид обладает высокой гидрофобностью, поскольку он содержит боковые цепи ароматических углеводородов, такие как Val, Лея, Встретились, Пхе, Тир, Ала, и т. д., или является нейтральным пептидом, использование денатурантов мембраны, таких как ДМФ или ДМСО, может помочь растворить полипептид.:
а. Денатуранты мембран высокой концентрации помогают растворить полипептид, разрушая его вторичную структуру..
б. Денатуранты мембран подходят для приготовления растворов для анализа пептидов., но может помешать исследованиям их биологической активности.
с. ДМФ – лучший денатурант. (максимальная концентрация может достигать 30%), и добавляют по каплям до растворения пептида..
д. При обращенно-фазовой хроматографии, ДМФ будет вытекать вместе с передним пиком элюента.. В зависимости от объема впрыска, пиковое значение может быть очень высоким. Большинство пептидов могут элюироваться в течение нескольких минут после элюирования большого количества ДМФ.. Если пептидная цепь маленькая и элюируется слишком рано, количество пептида будет уменьшено.
MOL меняет Руководство по роспуску Технической группы II
Как определить, нейтральны ли аминокислоты, кислая или щелочная, и рассчитаем метод растворения:
1. Назначьте каждую кислую аминокислоту в полипептидной последовательности, включая аспарагиновую кислоту Asp. (Д), глутаминовая кислота Glu (Э) и С-концевой карбоксил-СООН как -1; каждая основная аминокислота, включая аргинин Arg ( Р), лизин лиз (К), гистидин Его (ЧАС) и N-концевому амино-NH2 присвоено значение +1; нейтральные аминокислоты являются 0. На основании этого, рассчитывается значение всего полипептида, и оценка положительна. Пептиды с отрицательной оценкой называются основными пептидами., те, у кого отрицательный результат, называются кислотными пептидами., а пептиды с нулевым баллом называются нейтральными пептидами..
2. Если это щелочной пептид, попробуй сначала растворить его в воде; если его нельзя растворить, попробуй использовать 10% – 30% уксусная кислота; если пептид все еще нерастворим, попробуйте использовать чистую уксусную кислоту и трифторуксусную кислоту TFA. (<50 мкл) растворить его, а затем разбавьте раствор пептида до желаемой концентрации..
3. Если это кислотный пептид, попробуй сначала растворить его в воде; если его нельзя растворить водой, попробуй использовать 13% аммиачная вода (v/v) растворить его, и разведите раствор пептида до необходимой концентрации. Если пептидная последовательность содержит цистеин Cys (С), его нельзя растворить в щелочном растворе. Пожалуйста, попробуйте методы ниже.
4. Нейтральные пептиды обычно растворяют в органических растворителях.. Первый, попробуй использовать ацетонитрил (ацетонитрил), или метанол (метанол) или изопропанол (изопропанол) растворять; для очень гидрофобных пептидов, сначала растворить небольшим количеством диметилсульфоксида (ДМСО) и разбавить водой до необходимой концентрации.; если пептидная последовательность содержит цистеин Cys (С), используйте диметилформамид (ДМФ) или N-метилпирролидон (НМП) для роспуска. Для пептидов, склонных к агрегации, сначала добавьте 6М гуанидин·HCl или 8М мочевину (Мочевина) растворить их, а затем разбавить их до необходимой концентрации.
иллюстрировать:
1. Для облегчения хранения и последующего использования, рекомендуется растворять пептид до концентрации около 1-2 мг/мл.
2. Обычный пептидный лиофилизированный порошок может храниться при температуре -20°C более одного года.. Для растворенных пептидов, рекомендуется отбирать аликвоты и хранить при температуре -20°C.; если пептидная последовательность содержит метионин Met (М), цистеин Кислота Cys (С) или тирозин Тир (Да) рекомендуется хранить в бескислородной среде во избежание окисления.
Прикрепленный список аминокислот:
1.Нейтральные аминокислоты: глицин, аланин, лейцин, изолейцин, валин, цистеин, метионин, треонин, серин, фенилаланин, тирозин, триптофановая кислота, пролин, аспарагин и глутамин
Феда: Молекула аминокислот этого типа содержит только одну аминогруппу и одну карбоксильную группу.
2.Кислые аминокислоты: глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота
Функции: Молекула аминокислоты этого типа содержит одну аминогруппу и две карбоксильные группы.
3.Основные аминокислоты: лизин, аргинин, гистидин
Функции: Этот тип аминокислот содержит в своей молекуле диаминокарбоксильную группу.; гистидин имеет азотистое кольцо и является слабощелочным, а также является основной аминокислотой.
